摘要：诃子又名诃黎、诃黎勒、随风子，为使君子科植物的果实。诃子作为中药在中医临床上广泛使用，用于油脂抗氧化方面的研究在国内已见有专门报道。诃子果实中含丰富的鞣质和多元酚类，约为30%～40%已有文献报道，鞣质和多元酚类具有较好的抗氧化性。目的建立诃子提取物中鞣花酸含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法色谱条件Shim-packCLC-ODS色谱柱(150mm×6mm，5μm)，柱温30℃,用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(体积比30∶2∶68)作为流动相,检测波长为254nm。结果鞣花酸在0.268～5.36μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率为98.42%,RSD为1.13%(n=5)。结论该方法快速、简便、准确，可用于诃子中鞣花酸的含量测定。
【关键词】诃子;鞣花酸;高效液相色谱
鞣花酸(2，3，7，8-tetrahydroxybenzopyrano[5，4，3-cde]benzopyran-5，10-dione)是一种植物多酚类化合物[5](如图1)，为诃子中主要的活性成分之一，广泛存在于各种自然的软果、坚果等植物果实中。它对化学物质诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用，它能与人体内有害自由基结合，具有强力祛癌变功效，可以抗衰老、增加机体免疫，还具有降压、镇静作用，对多种细菌、病毒有很好的抑制作用[6]。因此鞣花酸有“克癌之星”“致癌物清除剂”之美称。从机理上讲，鞣花酸是一种抗氧化剂[7]，它可作为保健食品添加剂，研究、开发本品具有较高的经济价值和广泛的应用范围。
本实验建立了HPLC法测定诃子中鞣花酸含量的方法，并对文献报道的多种色谱条件进行了比较[8～10]，表明本文方法精确可行。
1仪器与试剂
日本岛津SPD-10AT高效液相色谱仪;SPD-10Avp检测器;SIL-10AP自动进样器;超纯水器(arium611UF，Sartorius);超声波清洗器(AS3120A，天津瑞森特);电子天平(AdventurerTM，AR2140，上海奥豪斯公司);旋转蒸发仪(R-200，瑞士Buchi)。岛津UV2100型，甲醇为色谱纯;实验用水为超纯水，蒸馏水自制，其它试剂均为国产分析纯试剂。
鞣花酸对照品(购自购自成都普瑞法科技开发有限公司),纯度≥98%。诃子(产自云南临仓和缅甸)。
2方法
2.1色谱条件色谱柱为岛津Shim-packCLC-ODS柱(150mm×6mm，5μm)，柱温30℃，用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(体积比34∶2∶64)作为流动相，检测波长为254nm。
2.2对照品溶液的制备精密称取鞣花酸对照品6.7mg，加甲醇25ml制成每毫升含0.268mg的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备精密称取诃子粉(均过60目筛)约1g，置于100ml具塞三角烧瓶中，加60%乙醇25ml，超声提取60min，过滤，用60%洗涤滤渣，合并滤液和洗涤液，50℃旋转蒸干，加甲醇定容至10ml，以0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为样品供试液，进样10μl。
2.4标准曲线制备精密吸取对照品溶液1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0μl进样，测定峰面积，并以色谱峰峰面积(A)对对照品的量(m)回归(包括原点)，得回归方程为A=7.5777E 06m 9.6700E 05(R=0.9999)。鞣花酸0.268～5.36μg范围内，线性关系良好。
2.5精密度和样品重复性实验重复进对照品溶液10μl/次，测得鞣花酸峰面积相对标准偏差RSD=0.9%(n=6);对同一样品按拟定的方法作多次测定，其含量相对标准偏差RSD=2.1%(n=5)。
a-鞣花酸对照品b-诃子样品
2.6回收率实验采用加样回收法取已知量的诃子，分别添加一定量的鞣花酸对照品，按拟定的方法测定，结果平均回收率为98.42%,RSD为1.13%(n=5)。
2.7样品测定按上述“2.3”项样品液制备方法测定云南产诃子和缅甸产诃子中鞣花酸的含量,云南产诃子和缅甸产诃子的鞣花酸含量分别为0.573mg/g(RSD=3.4%)和0.567mg/g(RSD=4.2%)。
3结果
3.1最佳检测波长的选择对鞣花酸对照品甲醇溶液的紫外-可见光(200～600nm)扫描发现，鞣花酸在254nm有最大吸收，故选择254nm为其检测波长。
3.2流动相的选择实验发现，若仅用甲醇和水作流动相，很难实现多酚物质的分离。通过改变流动相的pH值来提高分离度，由于pH太低会损坏色谱柱，导致柱效降低。本实验选用磷酸和磷酸盐缓冲体系，醋酸乙酯和甲醇作流动相，流动相中加入了一定量的磷酸，对鞣花酸起离子抑制作用，使其与杂质峰达到很好地分离。
3.3流速对分离度的影响在一定流速范围内，流速减少，柱效提高，分离度变大。但若流速过慢，分析时间延长，纵向扩散的影响变大，柱效降低。虽然提高流速可缩短分析时间，但若流速过高，物质来不及分离就被洗出，分离效果差，而且会损坏泵头和色谱柱。因此，流速对分离度的影响也很大。最终确定流速为1.0ml·min-1时，出峰时间和分离效果均较满意。
4结论
本法操作简单，结果准确，重复性好，可作为该产品的质量控制方法。由于诃子提取物具有良好的药用价值，对多个系统疾病具有良好的治疗作用，具有较好的开发前景。本研究采用HPLC法测定诃子中鞣花酸含量，方法快速、简便、准确，测定结果可靠，为诃子在食品开发及医药应用上提供科学依据。
(来源：中国化工仪器网)
